文献类型： 中文期刊

作者： 刘雅坤 ¹ ; 毕振威 ² ; 夏兴霞 ² ; 莫菲 ² ; 徐司雨 ² ; 钱晶 ² ; 谭业平 ² ; 诸玉梅 ² ; 赵建军 ¹ ;

作者机构： 1.黑龙江八一农垦大学动物科技学院

2.江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室

关键词： 犬瘟热病毒;中和活性;单链抗体;嵌合抗体

期刊名称： 畜牧兽医学报

ISSN： 0366-6964

年卷期： 2024 年 55 卷 012 期

页码： 5762-5773

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为减少和改善鼠源单克隆抗体在犬临床治疗中的异源性和功效，用RT-PCR方法从分泌抗犬瘟热病毒（CDV）中和单克隆抗体的鼠源杂交瘤细胞中扩增抗体重链可变区（V_H）和轻链可变区（V_L）,通过Linker将V_H和V_L连接获得单链抗体（scFv）基因，选择犬源抗体IgG B恒定区（Fc）连接到scFv的C末端获得犬源化嵌合单链抗体（scFv-Fc）基因；分别构建鼠源scFv与犬源化scFv-Fc的原核表达载体，通过大肠杆菌表达、纯化，用ELISA、IPMA、细胞融合抑制和中和试验检测表达抗体的特异性和中和活性。结果显示：CDV鼠源scFv、犬源化scFv-Fc的ELISA最低检出浓度分别为14.38和102.75μg·mL^-1;与表达的CDV H蛋白和CDV均发生特异性反应；能够抑制CDV H和F蛋白介导的细胞膜融合，完全保护细胞不出现病变的最低浓度分别为0.72和0.64μg·mL^-1。本研究成功制备了鼠源scFv与犬源化scFv-Fc嵌合抗体，为犬瘟热的临床治疗提供了候选抗体药物。