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狂犬病病毒核酸RT-LAMP检测方法的建立

文献类型： 中文期刊

作者： 黄元 1 ; 向华 1 ; 陈晶 1 ; 向蓉 1 ; 张健騑 1 ; 宣华 1 ;

作者机构： 1.广东省农科院兽医研究所广东省兽医医公共卫生公共实验室

关键词： 狂犬病病毒;RT-LAMP;检测

期刊名称： 中国人兽共患病学报

ISSN： 1002-2694

年卷期： 2011 年 27 卷 02 期

页码： 108-111

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 目的建立RT-LAMP方法,实现对狂犬病病毒核酸的快速、灵敏、简便的检测。方法针对狂犬病病毒的核衣壳蛋白基因(N基因)和大转录酶蛋白基因(L基因)中的高度保守区段分别设计了一套引物,建立了检测狂犬病病毒的快速一步式反转录-环介导恒温扩增(RT-LAMP)方法。样品提取总RNA后,加入BstDNA聚合酶、各种反应成分,于63℃恒温水浴箱中放置60min,80℃5min终止反应,加入荧光染料SYBR GREEN I,根据颜色变化肉眼判定结果。结果两套引物对狂犬病病毒RNA进行RT-LAMP检测,均有良好的特异性,灵敏度均比RT-巢式PCR高10倍以上。结论该方法简单、快速,不需电泳,利用染色剂肉眼判定结果,不需要大型仪器,能在70min内完成对狂犬病病毒RNA的检测,适用于可疑动物的快速检测,尤其适合基层使用。

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