文献类型： 中文期刊

作者： 夏启玉 ¹ ; 孙建波 ¹ ; 顾文亮 ² ; 卢娟 ³ ; 卢雪花 ⁴ ;

作者机构： 1.中国热带农业科学院热带生物技术研究所

2.海南大学农学院

3.农业部热带作物生物技术重点开放实验室

4.中国热带农业科学院环境与植物保护研究所

关键词： 肺炎克雷伯氏菌;启动子;分离;鉴定;gfp

期刊名称： 中国生物工程杂志

ISSN： 1671-8135

年卷期： 2011 年 31 卷 04 期

页码： 37-43

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 目的:旨在获得香蕉内生克雷伯氏菌KKWB-5的强启动子片段,以应用于香蕉内生工程菌的构建。方法:利用以kanr基因为报告基因的启动子探针载体pUCK在大肠杆菌Top10中克隆KKWB-5基因组DNA的启动子片段;将筛选到的高抗Kan的质粒导入KKWB-5,分别于LB和香蕉杆浸汁培养基(BSM)平板上检测它们的抗Kan水平;选择在BSM上抗Kan水平最高的片段15,检测该片段的基因间隔区15P的启动子活性,最后以gfp为报告基因来验证片段15P的启动子活性。结果:有7个抗Kan水平在2500μg/ml以上的Top10转化子;这7个质粒在导入KKWB-5后,它们在LB平板上的抗Kan水平有不同程度的增加,但在BSM培养基上则大为减弱;片段15P具有启动kanr基因的活性,且与原片段15的抗Kan水平相同;重组质粒pUCK-6-15Pgfp,以Top10和KKWB-5为宿主菌,在LB培养基上培养时,在荧光显微镜下均能发出绿色荧光;以KKWB-5为宿主菌,在BSM培养基上培养时,在荧光显微镜下也能发出绿色荧光。结论:片段15不仅在Top10中具有较强的启动子活性,而且在其供体菌KKWB-5中具有更强的启动子活性,其基因间隔区15P为主要的启动子区域,在BSM培养基上也具有较好的启动子活性,该启动子片段15P可以应用于KKWB-5内生工程菌的构建。