文献类型： 中文期刊
作者： 赵凯 1 ; 冯磊 2 ; 郑其升 2 ; 侯继波 2 ; 陈溥言 1 ;
作者机构： 1.南京农业大学动物医学院
2.国家兽用生物制品工程技术研究中心
关键词： CD163;猪肺泡巨噬细胞;重组细胞系
期刊名称： 江苏农业学报
ISSN： 1000-4440
年卷期： 2012 年 28 卷 03 期
页码： 110-115
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 以RT-PCR方法从原代猪肺泡巨噬细胞中获得CD163 cDNA序列,然后测序鉴定,对突变碱基进行修正,将修正后碱基序列克隆入真核表达载体pcDNA4.0中,构建重组真核表达质粒pcDNA4.0-CD163,通过BamHⅠ/NotⅠ双酶切及测序鉴定其正确性。使用脂质体2000将pcDNA4.0-CD163转染猪肺泡巨噬细胞系3D4/21(CRL-2843),通过Zeocin抗性筛选,建立稳定表达CD163的猪肺泡巨噬细胞系。RT-PCR、间接免疫荧光(IFA)检测结果表明CD163在mRNA和蛋白质水平均已表达。通过Zeocin抗性筛选,共获得8株表达CD163的重组细胞株,IFA检测结果表明表达的CD163定位于重组细胞的细胞膜表面。去除筛选抗性后连续传代10代,间接免疫荧光检测结果确定重组细胞株在10代内性状稳定,说明稳定表达CD163的猪肺泡巨噬细胞系构建成功。
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