文献类型： 中文期刊

作者： 孙朝徽 ¹ ; 于清海 ² ; 周勤 ² ; 宋立民 ² ; 姜秀凤 ² ; 王青林 ² ; 任建功 ² ; 王玉芬 ² ; 任玉芹 ³ ;

作者机构： 1.中国水产科学研究院北戴河中心实验站

2.;中国水产科学研究院北戴河中心实验站

3.;中国水产科学研究院北戴河中心实验站;

关键词： 牙鲆;卵原细胞;鉴定;分离;纯化;vasa

期刊名称： 中国细胞生物学学报

ISSN： 1674-7666

年卷期： 2018 年 09 期

页码： 1510-1517

收录情况： CSCD

摘要： 为获得高比例和高数量的卵原细胞,采用酶组合消化和Percoll梯度离心法开展了不同月龄牙鲆卵原细胞分离纯化的研究。通过光学观察及Vasa蛋白在生殖细胞的定位对卵原细胞进行了鉴定区分。结果表明,所获卵巢单细胞悬液中,6月龄每毫克卵巢组织获得的卵原细胞量为(9.86±1.02)×10~4个,显著高于18月龄和30月龄(P<0.05)。Percoll梯度离心后,卵原细胞主要分布于L-15与20% Percoll梯度液间、20%~35% Percoll梯度液间,其占比高达75%以上,显著高于纯化前卵原细胞占比(P<0.05);且细胞存活率高达84%以上,与纯化前细胞存活率无显著性差异(P>0.05)。除18月龄外,6月龄和30月龄每毫克卵巢组织获得的卵原细胞量纯化前后均无显著性差异(P>0.05)。该文通过酶组合消化和Percoll梯度离心的方法对最适月龄—6月龄牙鲆卵原细胞进行分离纯化,最终可获得高比例、高数量和高活性的卵原细胞,为进一步开展牙鲆生殖细胞移植、基因修饰等研究提供了必备的细胞来源。