文献类型： 中文期刊

作者： 周俊明 ¹ ; 何孔旺 ¹ ; 倪艳秀 ¹ ; 俞正玉 ¹ ; 茅爱华 ¹ ; 吕立新 ¹ ; 温立斌 ¹ ; 张雪寒 ¹ ; 郭容利 ¹ ; 李彬 ¹ ; 王小敏 ¹ ;

作者机构： 1.江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心

关键词： 猪链球菌2型;MRP;原核表达;间接ELISA

期刊名称： 江苏农业学报

ISSN： 1000-4440

年卷期： 2012 年 28 卷 01 期

页码： 86-91

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了建立猪链球菌2型溶菌酶释放蛋白(MRP)抗体间接ELISA检测方法,该研究首先克隆了MRP编码基因的部分片段,构建了重组表达质粒pET28a-mrp,并将该质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)进行表达,获得了58 000的重组蛋白,经Ni柱纯化后,免疫印迹显示MRP重组蛋白能够被猪链球菌2型抗体特异性识别。以纯化的MRP重组蛋白作为包被抗原,建立了猪链球菌2型MRP抗体检测间接ELISA方法。该ELISA方法的包被抗原浓度为10μg/ml,待检血清1∶50稀释,检测临床48份未免疫猪链球菌2型疫苗健康猪的血清。当效价(S/P)≥0.22时,判定待检血清样品为阳性;当S/P<0.22时,判定待检血清样品为阴性。运用建立的方法能特异性识别猪链球菌2型抗体,人工感染猪的MRP抗体于攻毒后14～28 d出现峰值,同时提示临床健康猪群的免疫功能存在个体差异。