文献类型： 中文期刊

作者： 黄琦雯 ¹ ; 王庆 ¹ ; 王英英 ¹ ; 李莹莹 ¹ ; 石存斌 ¹ ; 任燕 ¹ ; 高彩霞 ¹ ; 吴杰兴 ¹ ; 郑树城 ¹ ; 曾伟伟 ¹ ;

作者机构： 1.中国水产科学研究院珠江水产研究所农业部渔药创制重点实验室/广东省水生动物免疫重点实验室

关键词： 草鱼呼肠孤病毒;基因Ⅱ型;TaqMan荧光定量PCR;检测方法

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2017 年 10 期

页码： 804-809

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 基因Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒(GCRV-Ⅱ)是当前引起草鱼出血病暴发与流行的主要病原,为建立快速检测GCRV-Ⅱ的方法,本研究根据GCRV-ⅡRd Rp基因的保守区域序列设计引物及TaqMan探针,经反应参数优化,建立了检测GCRV-Ⅱ的荧光定量PCR方法。结果显示,该方法仅对GCRV-Ⅱ的靶基因序列进行扩增,与其它非靶目标核酸均无交叉反应;其最低检出量为3拷贝/μL病毒核酸,比普通PCR的敏感度高100倍;组内和组间重复试验变异系数均小于1%。采用该方法检测60份草鱼出血病疑似样品,GCRV-Ⅱ阳性检出率为75%(45/60),与细胞分离结果一致。应用该方法分析了GCRV-Ⅱ在不同细胞和不同培养方式下病毒的增殖含量,结果显示GSB和PSF细胞增殖量最大,达106拷贝/μL~107拷贝/μL病毒核酸,转瓶接种比常规的细胞培养瓶和培养板接种其病毒含量低2个数量级。本研究建立的GCRV-ⅡTaqMan荧光定量PCR方法具有高效、特异、敏感、可重复性强的优点,适用于GCRV-Ⅱ的临床快速检测和病毒定量分析。