文献类型： 中文期刊

作者： 李威 ¹ ; 吴辉亮 ² ; 张澳晴 ² ; 王英英 ² ; 郑树城 ² ; 李莹莹 ² ; 莫绪兵 ² ; 任燕 ² ; 潘厚军 ² ; 尹纪元 ² ; 施雯 ³ ; 周文礼 ¹ ; 王庆 ² ;

作者机构： 1.天津农学院水产学院

2.中国水产科学研究院珠江水产研究所/农业农村部渔用药物创制重点实验室/广东省水产动物免疫与绿色养殖重点实验室

3.东北农业大学动物科学技术学院

关键词： 草鱼呼肠孤病毒;VP6 N端蛋白;原核表达;多克隆抗体;抗原性;中和活性

期刊名称： 黑龙江畜牧兽医

ISSN： 1004-7034

年卷期： 2025 年 004 期

页码： 119-124

收录情况： 北大核心

摘要： 为了给基因Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒(Grass carp reovirus, GCRV-Ⅱ)诊断方法的建立和相关基因工程疫苗的研制提供材料，试验采用PCR方法扩增了GCRV-ⅡVP6 N端蛋白编码基因，将其克隆至原核表达载体pET-32a(+)中，构建重组表达质粒pET32a(+)-VP6-N,转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中，构建重组菌pET32a(+)-VP6-N/BL21,经IPTG诱导并优化诱导条件表达GCRV-ⅡVP6 N端蛋白，并对表达的重组蛋白进行可溶性分析，采用Western-blot分析重组蛋白的抗原性，以纯化的重组蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体，采用间接ELISA法测定多克隆抗体效价，采用体外中和试验测定多克隆抗体的体外中和效价。结果表明：扩增出大小为684 bp的GCRV-ⅡVP6 N端蛋白编码基因，构建的重组表达质粒pET32a(+)-VP6-N的PCR鉴定、酶切鉴定结果均与预期大小一致且无碱基突变。重组菌pET32a(+)-VP6-N/BL21诱导后超声破碎沉淀在40 ku处出现特异性条带，与预期蛋白质分子质量大小一致；而上清液未出现明显特异性条带。重组蛋白表达的IPTG最佳诱导浓度为0.6 mmoL/L,最佳诱导时间为6 h。重组蛋白能够与GCRV-Ⅱ阳性草鱼血清发生特异性反应，但与健康草鱼血清不发生反应。所制备多克隆抗体效价为1∶1 000 000,体外中和效价为1∶40。说明试验成功表达了重组GCRV-ⅡVP6 N端蛋白并制备了多克隆抗体，重组蛋白以包涵体形式存在，具有良好抗原性和免疫原性，制备的多克隆抗体效价较高且具有中和活性。