文献类型： 中文期刊

作者： 肖思民 ¹ ; 侯泽玮 ¹ ; 刘方幸妍 ¹ ; 赵祎晨 ¹ ; 尹纪元 ² ; 徐伟 ¹ ; 吕利群 ¹ ; 王浩 ¹ ;

作者机构： 1.上海海洋大学国家水生动物病原库

2.中国水产科学研究院珠江水产研究所农业农村部渔药创制重点实验室

关键词： GCRV-Ⅱ;RAA;CRISPR/Cas12a;现场诊断

期刊名称： 水生生物学报

ISSN： 1000-3207

年卷期： 2024 年 48 卷 011 期

页码： 1905-1914

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为建立一种特异性强、灵敏度高、操作便捷的Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒(GCRV-Ⅱ)检测方法,研究利用重组酶介导链置换核酸扩增技术(Recombinase-aid amplification,RAA)与成簇的规律间隔短回文重复序列(CRISPR)系统相结合,构建了GCRV-Ⅱ病毒RAA结合CRISPR/Cas12a可视化"一步"快速检测方法.首先选择GCRV-Ⅱ毒株间序列保守,不同基因型GCRV间差异明显的s6基因(GQ896337)的保守区设计5对RAA候选引物和2对crRNA,合成并筛选出特异性引物和crRNA组合.其次测试反应的特异性、灵敏度和准确性.最后建立下层扩增相、上层检测相的"一步法"反应体系.该检测方法在37℃恒温下反应可检测出GCRV-Ⅱ,最低检测限为102 copies/μL.对24份临床样本进行检测,该检测方法阳性检出率高于现行国标PCR法.研究建立的GCRV-Ⅱ检测方法操作便捷、特异性高、灵敏度好、可重复性强、与设备兼容性好、在蓝光灯下可通过肉眼判断检测结果.