文献类型： 中文期刊

作者： 方珍珍 ¹ ; 杨圆圆 ¹ ; 于宏 ² ; 孙学亮 ¹ ; 石洪玥 ¹ ; 陈成勋 ¹ ; 季延滨 ¹ ; 李莹莹 ³ ;

作者机构： 1.天津农学院水产学院/天津市水产生态及养殖重点实验室

2.天津市水产研究所

3.农业农村部渔用药物创制重点实验室/广东省水产动物免疫与绿色养殖重点实验室/中国水产科学研究院珠江水产研究所

关键词： 鲤浮肿病毒(CEV);P4a蛋白;原核表达;多克隆抗体

期刊名称： 农业生物技术学报

ISSN： 1674-7968

年卷期： 2025 年 33 卷 011 期

页码： 2547-2556

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 鲤浮肿病毒(Carp edema virus, CEV)是近年来流行的一种DNA病毒，严重危害着锦鲤(Cyprinus carpio haematopterus)和鲤(Cyprinus carpio)养殖的健康发展。本研究以鲤浮肿病毒的P4a基因组序列设计特异性引物，克隆P4a基因序列全长，再通过原核表达系统构建重组表达质粒p ET-32a-P4a，经异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside, IPTG)诱导表达后获得P4a重组蛋白，经SDSPAGE鉴定、纯化、复性后所得His标签融合蛋白免疫新西兰大白兔(Oryctolagus cuniculus)制备多克隆抗体，并对该抗体进行二喹啉甲酸(bicinchoninic acid assay, BCA)法浓度检测和Western blot鉴定。结果表明，本研究成功构建pET-32a-P4a原核表达载体，经NCBI Blast比对分析，载体序列与P4a蛋白理论序列同源性为99%;BCA法检测该抗体浓度为2.05 mg/mL;SDS-PAGE和Western blot鉴定显示，该抗体免疫原性良好。综上，本研究成功制备CEV P4a蛋白多克隆抗体，为CEV的免疫学检测、疫苗研发等提供了数据支持。