文献类型： 中文期刊

作者： 崔世龙 ¹ ; 魏晓锋 ² ; 司伏生 ³ ; 于瑞嵩 ³ ; 董世娟 ³ ; 陈冰清 ³ ; 李春华 ³ ;

作者机构： 1.上海海洋大学水产与生命学院

2.上海实验动物研究中心

3.上海市农业科学院畜牧兽医研究所上海农业遗传育种重点实验室

关键词： 猪δ冠状病毒;S蛋白;真核表达;多克隆抗体

期刊名称： 微生物学通报

ISSN： 0253-2654

年卷期： 2025 年 52 卷 009 期

页码： 4171-4181

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【背景】猪δ冠状病毒(porcine deltacoronavirus, PDCoV)是2012年首次报道的一种猪肠道冠状病毒，主要引起以腹泻、呕吐和脱水为特征的猪胃肠道疾病，与猪流行性腹泻、猪传染性胃肠炎等的临床症状类似，难以区别。PDCoV具有4种结构蛋白，棘突(spike, S)蛋白位于PDCoV病毒粒子表面，由S1和S2 2个亚基组成，是病毒中和抗体的主要靶标。【目的】应用真核系统表达PDCoV S1蛋白并进行纯化，制备该蛋白的多克隆抗体。【方法】通过RT-PCR技术扩增PDCoV CHN-JS-2018的S1基因，连接到pCAGGS真核表达载体中，构建pCAGGS-PDCoV-S1-mFc和pCAGGS-PDCoV-S1-hFc真核表达质粒，经测序正确后转染HEK293T细胞，采用间接免疫荧光(immunofluorescence assay, IFA)和Western blotting检测重组蛋白表达。以纯化的PDCoV-S1-mFc重组蛋白免疫BALB/c小鼠，制备多克隆抗体，IFA检验多抗血清的反应原性，间接ELISA测定多抗血清效价。【结果】构建的pCAGGS-PDCoV-S1-mFc和pCAGGS-PDCoV-S1-hFc真核表达质粒能够在HEK293T细胞中表达，并与PDCoV阳性小鼠血清特异性结合，制备的PDCoV S1重组蛋白的多克隆抗体效价达到1:64 000以上，中和抗体效价为1:185，可用于猪δ冠状病毒检测的间接免疫荧光试验、Western blotting检测。【结论】本研究真核表达的PDCoV S1重组蛋白具有较强的免疫原性，可诱导小鼠产生较高效价的抗体，制备的多克隆抗体具有良好的反应性和中和活性，为后续开展PDCo V诊断、S1单克隆抗体制备、疫苗研制等奠定了基础。