文献类型： 中文期刊

作者： 席俊 ¹ ; 张改平 ¹ ; 何礼洋 ¹ ; 朱礼倩 ² ; 南楠 ² ; 张利娜 ² ; 邓瑞广 ² ; 李学伍 ² ;

作者机构： 1.吉林大学畜牧兽医学院

2.河南省农业科学院河南省动物免疫学重点实验室

关键词： 牛Fcγ2R;胞外区基因;克隆;表达

期刊名称： 细胞与分子免疫学杂志

ISSN： 1007-8738

年卷期： 2008 年 24 卷 02 期

页码： 178-180

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 目的:构建牛Fcγ2R胞外区基因的原核表达载体,并在E.coliBL21(DE3)中表达。方法:提取健康成年牛的白细胞总RNA,经RT-PCR扩增牛Fcγ2R胞外区基因片段,并将其克隆到载体pGEM-TEasy,经限制性内切酶EcoRI和NotI双酶切鉴定及序列测定后,再将其亚克隆入原核表达载体pET28a中,构建重组质粒pET-2R,转化E.coliBL21(DE3)经IPTG诱导表达组氨酸融合蛋白。结果:获得682bp的编码牛Fcγ2R胞外区基因片段。以构建的重组质粒pET-2R转化E.coliBL21(DE3)后,经IPTG诱导,表达出相对分子质量(Mr)约为30000的重组蛋白。SDS-PAGE分析显示,表达的蛋白主要以不溶性包涵体的形式存在于E.coliBL21(DE3)的胞质中,Western blot检测表明该蛋白能和牛IgG2结合。结论:成功地构建了原核表达载体pET-2R,并表达出重组蛋白。为研究牛IgG和受体的相互作用机制及其介导的免疫反应打下了基础。