文献类型： 中文期刊

作者： 陈汝佳 ¹ ; 李婷 ² ; 余波 ² ; 张亚楠 ² ; 蒲龄 ² ; 欧德渊 ¹ ; 徐景峨 ² ;

作者机构： 1.贵州大学动物科学学院

2.贵州省农科院畜牧兽医研究所

关键词： 鸭疫里默氏杆菌;外膜蛋白A;原核表达;ELISA

期刊名称： 中国兽药杂志

ISSN： 1002-1280

年卷期： 2022 年 56 卷 004 期

页码： 9-16

摘要： 为建立鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)间接酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,以RA贵州分离株RAG06基因组为模板扩增并克隆鸭疫里默氏杆菌OmpA基因,构建pET32a-OmpA重组原核表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,重组菌经诱导、超声、纯化后,通过SDS-PAGE和Western blotting分析鉴定获得OmpA重组蛋白大小约57 KD;以OmpA重组蛋白为包被抗原初步建立ELISA方法并优化,经多次方阵检测结果显示,OmpA蛋白以2.243 mg/mL的浓度进行包被,血清以1∶ 100稀释,抗原包被条件为4℃过夜、封闭条件为37℃120 min、血清反应时间为37℃60 min、酶标抗体工作浓度为1∶ 1000、酶标抗体反应时间为37℃60 min、显色时间为15 min为最佳条件.确定临界值为0.389.特异性试验表明RA阳性血清有较好反应外,其他血清均无明显反应.批内变异系数2.77%~8.00%,批间变异系数为1.10%~7.80%.当阳性血清稀释比例为1:1600时,仍可判断为阳性,敏感性较高.应用该方法检测贵州省120份鸭血清、65份鹅血清证明该方法能用于水禽源鸭疫里默氏杆菌的检测,应用该方法检测灭活疫苗免疫后的鸭血清和卵黄抗体,结果表明符合灭活疫苗消长规律.试验建立的ELISA方法,为RA的流行病学调查和RA抗体监测提供了血清学诊断方法.