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绿色木霉TvALP-linker-TvRBL融合基因的构建与原核表达

文献类型： 中文期刊

作者： 徐杨玉 1 ; 温世杰 1 ; 李海芬 1 ; 李玲 2 ; 梁炫强 1 ;

作者机构： 1.广东省农业科学院作物研究所

2.华南师范大学生命科学学院

关键词： 绿色木霉;TvALP-linker-TvRBL融合基因;信号肽;原核表达

期刊名称： 生物技术通报

ISSN： 1002-5464

年卷期： 2015 年 01 期

页码： 131-137

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 在Tv ALP基因和Tv RBL基因间加入一段柔性链接头(linker)基因序列,构建融合基因。生物信息学分析表明该融合基因含有一段信号肽序列。利用RT-PCR技术从绿色木霉菌丝体总RNA中扩增出Tv RBL基因、Tv ALP基因和去除信号肽的ΔTvALP基因,分别克隆到原核表达载体p ET30a,构建重组质粒p ET30a-Tv ALP-linker-Tv RBL和p ET30a-ΔTv ALP-linker-Tv RBL,转化大肠杆菌BL21(DE3)p Lys S,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达。SDS-PAGE电泳分析结果表明,去除信号肽的表达质粒p ET30a-ΔTv ALP-linker-Tv RBL在大肠杆菌BL21(DE3)p Lys S中获得了表达,在60 k D处有一条蛋白质特异条带,与预测的目的产物蛋白条带大小一致。

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