文献类型： 中文期刊

作者： 简永利 ¹ ; 蔡建平 ² ; 于三科 ¹ ; 覃宗华 ² ; 林青 ¹ ; 叶秀华 ² ; 陈闻 ² ; 党海斌 ¹ ;

作者机构： 1.西北农林科技大学动物科技学院

2.广东省农业科学院兽医研究所广东省兽医公共卫生公共实验室

关键词： 柔嫩艾美耳球虫;表面抗原2;基因克隆;表达

期刊名称： 畜牧与兽医

ISSN： 0529-5130

年卷期： 2006 年 38 卷 06 期

页码： 10-13

收录情况： 北大核心

摘要： 根据生物信息学预测的基因序列设计引物,应用RT-PCR方法从柔嫩艾美耳球虫第二代裂殖子总RNA扩增获得了鸡柔嫩艾美耳球虫表面抗原2(surface antigen 2,SAG2)基因序列,将其与pGEM-T easy载体连接后转化E.coliDH5α,筛选阳性克隆,以带有限制酶切位点的特异性引物用PCR方法扩增不含SAG2 N端信号肽序列的ORF序列后克隆至表达载体pET-32 a(+),构建了重组表达质粒pET-32 a(+)-SAG2,并将其转化至E.coliBL21(DE3)。经IPTG诱导,获得了SAG2重组抗原在大肠杆菌的高效表达,重组蛋白的表达量约占菌体总蛋白的35%,融合蛋白的分子量约为47 ku。菌体经超声处理后进行SDS-PAGE分析表明,表达蛋白以包涵体的形式存在。