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冬瓜SSR-PCR体系优化及引物筛选

文献类型： 中文期刊

作者： 潘珍珍 1 ; 吴才君 2 ; 刘文睿 2 ; 江彪 2 ; 谢大森 2 ;

作者机构： 1.江西农业大学

2.江西农业大学;广东省农业科学院蔬菜研究所;广东省蔬菜新技术研究重点实验室

关键词： 冬瓜;SSR-PCR;体系优化;引物筛选

期刊名称： 分子植物育种

ISSN： 1672-416X

年卷期： 2015 年 13 卷 04 期

页码： 898-902

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 本研究利用L16(54)正交试验设计研究了影响冬瓜SSR-PCR的五个因子(10×Buffer(含Mg2+),d NTP,DNA,引物,r Taq),研究结果表明Buffer(含Mg2+)和r Taq对PCR影响最明显,最终筛选出最佳反应体系:10×Buffer 2.0μL(1×Buffer),d NTP 2.0μL(200μmol/μL),DNA 0.6μL(6 ng/μL),引物0.4μL(0.2μmol/L)。体系体积为20μL,循环数为35。引物筛选程序为:94℃预变性3 min,94℃变性45 s,58℃~68℃复性30 s,5个循环,每个循环退火温度降2℃,72℃延伸1 min,94℃变性30 s,50℃~58℃复性1 min,8个循环,每个循环退火温度降低1℃,72℃延伸1 min,94℃变性30 s,50℃复性30 s,72℃延伸1 min,共30个循环,72℃延伸7 min。本研究建立了适合冬瓜的SSR反应体系和引物多态性筛选程序。

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