文献类型： 中文期刊
作者： 曾伟伟 1 ; 王庆 1 ; 张乐生 2 ; 刘宝芹 2 ; 刘永奎 2 ; 石存斌 2 ; 曾令兵 1 ; 吴淑勤 2 ;
作者机构： 1.农业部淡水生物多样性保护与利用重点开放实验室中国水产科学研究院长江水产研究所
2.中国水产科学研究院珠江水产研究所
关键词： 呼肠孤病毒;草鱼;VP4蛋白;多克隆抗体
期刊名称： 中国生物制品学杂志
ISSN： 1004-5503
年卷期： 2011 年 24 卷 12 期
页码： 1482-1485
收录情况： CSCD
摘要： 目的原核表达、纯化草鱼呼肠孤病毒(Grass carp reovirus,GCRV)HZ08株VP4蛋白,并制备其多克隆抗体。方法采用PCR法扩增GCRV HZ08株S6基因部分节段,插入原核表达载体pET-32a(+),构建重组表达质粒pET-32a-S6,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达。表达的重组蛋白纯化后免疫新西兰白兔,制备多克隆抗体,采用间接ELISA法测定其效价,Western blot鉴定其特异性。结果重组表达质粒经双酶切及测序证实构建正确;表达的目的蛋白相对分子质量约为51 000,表达量占菌体总蛋白的73%,主要以包涵体形式表达,反应原性良好;制备的多克隆抗体效价约为1∶8 000,且具有较高的特异性。结论成功制备了GCRV HZ08株VP4蛋白高效价多克隆抗体,为VP4蛋白功能的深入研究、抗原表位分析、草鱼出血病诊断方法的建立及相关基因工程疫苗的研发奠定了基础。
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