文献类型： 中文期刊
作者： 林湛松 1 ; 王健华 1 ; 刘志昕 1 ;
作者机构： 1.中国热带农业科学院热带生物技术研究所
关键词： 香蕉条斑病毒;原核表达;ELISA;western blotting
期刊名称： 生物学杂志
ISSN： 2095-1736
年卷期： 2011 年 28 卷 05 期
页码： 50-54
收录情况： CSCD
摘要： 以课题组保存的连接在pMD-18T载体上的香蕉条斑病毒河口分离物全基因组为模板,设计一对特异引物,经过PCR扩增,切胶回收,并通过与pET32(b)载体共同双酶切及T4连接酶连接,得到重组载体pET32-ORF2。将获得的重组质粒pET32-ORF2转化表达菌株E.coli BL21(DE3)感受态细胞,得到表达BSV的ORFⅡ的工程菌。经0.1mmol/L的IPTG诱导表达,超声波破碎后,获得的融合蛋白大多为包含体,但仍有少部分为可溶性蛋白可以进行后续的纯化步骤。将上述可溶性融合蛋白通过Ni2+-NTA亲和层析柱纯化,获得纯度较高的融合蛋白。以纯化蛋白作为抗原免疫家兔,得到特异性抗血清。间接ELISA以及western blotting表明,所得抗血清效价和特异性都较高,可以用于检测。为BSV的快速检测以及一些相关后续理论研究工作奠定了一定基础。
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