文献类型： 中文期刊

作者： 陈龙 ¹ ; 吴兴利 ¹ ; 闫晓刚 ¹ ; 谷巍 ¹ ; 徐海燕 ¹ ; 钱爱东 ¹ ; 王春凤 ¹ ; 张芳毓 ¹ ;

作者机构： 1.吉林省农业科学院畜牧科学分院

关键词： 内切葡聚糖酶;贝莱斯芽孢杆菌;克隆;表达;酶学性质

期刊名称： 中国畜牧杂志

ISSN： 0258-7033

年卷期： 2019 年 009 期

页码： 100-108

收录情况： 北大核心

摘要： 本实验利用PCR方法扩增1株贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)源的内切葡聚糖酶基因(CMCase),插入到p ET32a(+)中构建重组表达大肠杆菌系统,对重组内切葡聚糖酶基因进行生物信息学分析以及酶学性质研究.结果表明:内切葡聚糖酶由499个氨基酸组成,预测分子量为55.02 ku,最大开放阅读框ORF约为1 500 bp.经诱导表达优化后,培养上清中可检测到内切葡聚糖酶酶活力为5.81 IU/mL,菌体中为1.61 IU/mL,诱导后原菌液直接超声破碎处理可达7.41 IU/mL,其酶活力为野生菌株的2.3倍.重组内切葡聚糖酶具有典型内切纤维素酶的特征,其最适酶反应温度和pH分别为50℃和6,在60℃条件下放置1 h相对剩余酶活力可保持在70%以上,在pH 6~10范围内可保持90%以上.Na+、Mg2+可以促进重组内切葡聚糖酶酶活力,而Co2+、Hg2+、Fe2+等金属离子以及表面活性剂SDS则具有较强的抑制作用.由此可见,本实验在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达了内切葡聚糖酶,且该酶主要进行分泌表达,具有一定的耐热性和良好的pH稳定性.