文献类型： 中文期刊
作者： 任鹏丽 1 ; 陈庭金 1 ; 黄艳 1 ; 曾伟伟 1 ; 余新炳 1 ;
作者机构： 1.中山大学中山医学院寄生虫学教研室热带病防治研究教育部重点实验室;中国水产科学研究院珠江水产研究所农业部渔用药物创制重点实验室广东省免疫技术重点实验室
关键词： GCRV HZ08;VP4;原核表达
期刊名称： 热带医学杂志
ISSN： 1672-3619
年卷期： 2016 年 02 期
页码： 140-144+271
摘要： 目的原核表达草鱼呼肠孤病毒(GCRV)HZ08株S6基因特定保守区域编码的外衣壳蛋白VP4并探究其免疫原性,为草鱼出血病(GCHD)防治提供新思路。方法将VP4基因特定保守区域克隆到原核表达质粒p ET-32a(+)中,诱导表达并用镍柱进行纯化,用纯化的目的蛋白免疫SD大鼠获取免疫血清;应用ELISA检测实验组(重组蛋白皮下免疫大鼠)和对照组(PBS免疫大鼠)血清Ig G抗体滴度及亚类的水平;应用间接免疫荧光实验(IFA)检测r VP4抗血清对病毒的识别情况。结果PCR、双酶切及DNA测序结果均表明p ET32a-VP4重组质粒构建成功;SDSPAGE结果表明目的基因在大肠杆菌BL21/DE3中获得高效表达,融合蛋白分子量约为43 k Da,且在37℃、1mmol/L IPTG条件下诱导表达效果最优;经亲和层析获得了高纯度蛋白;免疫大鼠6周后血清Ig G抗体滴度高达1∶819 200,Ig G1、Ig G2a水平差异无统计学意义(P>0.05);IFA结果显示抗血清组特异性荧光显著,而对照组未见荧光。结论 GCRV-HZ08 VP4具有良好的免疫原性,可诱导大鼠产生Th1/Th2混合型免疫反应,且r VP4抗血清可识别该病毒,为VP4作为疫苗候选分子提供了依据。
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