文献类型： 中文期刊

作者： 王雅慧 ¹ ; 王英英 ² ; 王庆 ² ; 李波 ² ; 李莹莹 ² ; 尹纪元 ² ; 杨广 ¹ ; 曾伟伟 ³ ;

作者机构： 1.天津农学院水产学院

2.中国水产科学研究院珠江水产研究所/农业农村部渔药创制重点实验室/广东省水产动物免疫技术重点实验室

3.佛山科学技术学院生命科学与工程学院/广东省动物分子设计与精准育种重点实验室/普通高校动物分子设计与精准育种重点实验室

关键词： 罗非鱼;罗非鱼湖病毒（TiLV）;S10编码蛋白;重组蛋白;单克隆抗体;免疫学方法

期刊名称： 广东农业科学

ISSN： 1004-874X

年卷期： 2021 年 011 期

页码： 112-118

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】制备抗罗非鱼湖病毒（Tilapia Lake Virus, TiLV）S10节段基因编码蛋白的单克隆抗体（Monoclonal antibody,MAb）。【方法】构建含有TiLV S10基因节段的重组表达质粒pET32a-S10,并将其转化至BL21（DE3）感受态细胞,经IPTG诱导表达和镍柱纯化获得高纯度重组S10蛋白;用纯化的重组蛋白免疫6～8周龄雌性BALB/c小鼠多次后,取其脾细胞与SP2/0细胞进行融合获得杂交瘤细胞,采用有限稀释法和ELISA方法,筛选获得2株能稳定分泌抗S10蛋白MAb的杂交瘤细胞株,分别命名为2C3和2E3,并对其特异性、亚型和效价进行分析。【结果】Western blot结果显示,2C3和2E3均能识别S10重组蛋白及TiLV,间接免疫荧光试验（IFA）结果表明,2C3和2E3只与TiLV感染的TiB细胞呈阳性反应。亚型检测结果显示,2C3抗体为IgG1/к型,2E3抗体为IgG2a/к型。抗体效价测定结果表明,两种MAb的效价分别为1∶12 800,1∶51 200。【结论】抗TiLV-S10蛋白MAb特异性强、效价高,可为后续TiLV疫苗的研发、免疫学方法的建立及S10蛋白功能的研究提供重要材料和支撑。