文献类型： 中文期刊
作者： 肖红卫 1 ; 刘中华 2 ; 刘西梅 1 ; 郑新民 1 ; 乔宪凤 1 ; 李莉 1 ;
作者机构： 1.湖北省农业科学院
2.西北农林科技大学
关键词： shRNA表达载体;Vero细胞;脂质体;EGFP表达载体;转染
期刊名称： 江西农业学报
ISSN： 1001-8581
年卷期： 2010 年 22 卷 10 期
页码： 118-121+125
摘要： 目的:旨在观察不同茎部长度串联shRNA表达载体对EGFP基因的干扰作用。方法:采用体外培养的Vero细胞,选用不同茎部长度串联shRNA表达载体+EGFP表达载体+脂质体转染的方法,将构建好的干扰载体转染Vero细胞,然后使用实时荧光定量RT-PCR对其沉默效应进行定量分析。在小鼠腿部肌肉注射干扰质粒,实时荧光定量RT-PCR对其沉默效应进行定量分析。结果:转染Vero细胞时,pGenesilR21、pGenesilR27和pGenesilR29荧光表达量仅为对照质粒pEGFP-C1的4.3%、3.0%和6.9%;小鼠腿部肌肉注射干扰质粒时,pGenesilR21、pGenesilR27和pGenesilR29荧光表达量仅为对照质粒pEGFP-C1的2.5%、1.3%和5.1%。结论:在细胞和个体水平,不同茎部串联干扰载体对目的基因的抑制效应均很明显(达到90%以上),比单一位点产生的沉默效应要强许多,不同茎部长度干扰效应彼此间差异不显著。
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