文献类型： 中文期刊

作者： 张红 ¹ ; 张改平 ¹ ; 章金刚 ² ; 杨艳艳 ¹ ; 易明林 ¹ ; 李姣 ¹ ; 韩鸿鹏 ³ ;

作者机构： 1.河南省农业科学院

2.军事医学科学院

3.河南教育学院

关键词： 鸡Igλ轻链;pcDNA-λ;COS7细胞;真核分泌表达;单克隆抗体

期刊名称： 细胞与分子免疫学杂志

ISSN： 1007-8738

年卷期： 2008 年 24 卷 03 期

页码： 260-262

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 目的:构建重组载体pcDNA-λ并在COS7细胞分泌表达鸡Igλ轻链,制备抗鸡Igλ轻链的单克隆抗体(mAb)。方法:PCR扩增带有信号肽的鸡Igλ轻链基因,限制性酶切消化后,定向克隆于真核表达载体pcDNA3,构建具有6×His标签、分泌表达的重组载体pcDNA-λ。重组载体转染COS7细胞后,SDS-PAGE分析真核表达载体pcDNA-λ在COS7细胞的分泌表达。用2×106个雏鸡B淋巴细胞免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与骨髓瘤细胞融合,分别采用细胞免疫荧光和间接ELISA筛选阳性杂交瘤克隆。结果:成功构建分泌表达鸡Igλ轻链的重组载体,SDS-PAGE分析表明在COS7细胞上清有目的蛋白的分泌表达。杂交瘤细胞经筛选与鉴定,获得2株分泌抗鸡Igλ轻链mAb的杂交瘤细胞株,Western blot检测到该mAb对重组鸡Igλ轻链的反应性。结论:构建了重组表达载体pcDNA-λ并在COS7细胞上清分泌表达了重组鸡Igλ轻链。并用淋巴细胞杂交瘤技术成功筛选出抗鸡Igλ轻链mAb。为深入研究鸡Igλ轻链的结构与功能奠定了基础。