文献类型： 中文期刊

作者： 任广明 ¹ ; 林玉杰 ¹ ; 徐黎明 ¹ ; 赵景壮 ¹ ; 邵轶智 ¹ ; 卢彤岩 ¹ ;

作者机构： 1.中国水产科学研究院黑龙江水产研究所黑龙江省水生动物病害与免疫重点实验室

关键词： 虹鳟;fabp10;真核表达载体;脂质代谢

期刊名称： 水产学杂志

ISSN： 1005-3832

年卷期： 2023 年 001 期

页码： 1-7

收录情况： 北大核心

摘要： 为探究虹鳟（Oncorhynchus mykiss）脂肪酸结合蛋白10（fatty acid binding protein 10,fabp10）基因序列信息及其所编码蛋白的结构和功能等，本试验根据Gen Bank数据库公布的河鳟（Salmo trutta）fabp10基因的CDS序列信息设计引物，通过RT-PCR获得fabp10基因片段，将目的片段与p MD-18-T载体连接转化DH5α感受态细胞，构建p MD-18-T-fabp10克隆载体，双酶切回收基因片段，构建pc DNA3.1-fabp10真核表达载体，分析fabp10基因在虹鳟不同组织中的表达，经双酶切、测序鉴定构建成功。将表达载体转染至EPC细胞，分别于24h、36 h、48 h后收集细胞进行荧光定量PCR检测。结果显示：虹鳟fabp10基因CDS区与Gen Bank数据库中Salmo trutta fabp10基因CDS区同源性高达100%。生物信息学分析发现，fabp10基因编码区全长378 bp，编码126个氨基酸。Fabp10蛋白主要分布在细胞质中，存在23个潜在磷酸化位点。转染pc DNA3.1-fabp10可显著提高EPC细胞中fabp10 m RNA的表达（P＜0.05）。RT-q PCR结果显示：fabp10基因在肝脏中表达丰度最高，随之为肾脏、肌肉、肠、脾脏、心脏，在脑中表达量最低。本试验成功扩增出fabp10基因CDS区并构建了真核表达载体，成功预测分析了其结构和功能，为研究虹鳟机体脂质代谢过程提供了基础。