文献类型： 中文期刊

作者： 叶欢 ¹ ; 王艺舟 ² ; 杜浩 ¹ ; 岳华梅 ¹ ; 阮瑞 ¹ ; 罗江 ¹ ; 李创举 ¹ ;

作者机构： 1.中国水产科学研究院长江水产研究所

2.贵州大学动物科学学院

关键词： 精巢;AST细胞系;传代培养;核型分析;基因表达特征;中华鲟

期刊名称： 水生生物学报

ISSN：

年卷期： 2023 年 008 期

页码： 1261-1268

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了开展中华鲟（Acipenser sinensis）种质资源保存及其精原干细胞体外培养的研究,采用蛋白酶消化法,对中华鲟精巢组织细胞进行原代培养,建立了中华鲟精巢细胞系（Acipenser sinensis testicular cell line, AST）,经352d传代培养,已稳定传至80代。中华鲟精巢细胞系形态主要呈类纤维状,培养基为DMEM,培养温度为25℃,最适血清浓度为15%。正常传代的AST细胞冻存、复苏后,经台盼蓝染色,约（81.36±1.13）%的细胞具有活性,复苏后细胞仍生长旺盛。染色体核型分析结果显示,第30代中华鲟精巢细胞系染色体数目分布在142—310,众数为264。通过RT-PCR检测发现,在P0和P1细胞中, Sertoli细胞特异表达基因（amh和gsdf）、Leydig细胞特异表达基因（cyp17a1）和生殖细胞特异表达基因（dazl、dnd和vasa）都有表达,且表达量与精巢中的相似;在P15、P30和P60细胞中,只有amh和vasa基因有微弱的表达,说明细胞系传代到了后期,只含有极少量的Sertoli细胞和生殖细胞。通过脂质体转染法将pEGFP-N3质粒转入AST细胞中,可表达增强型绿色荧光蛋白（Enhanced green fluorescent protein, EGFP）。AST细胞系的建立为中华鲟种质资源的保存、精原干细胞的体外增殖与分化、基因功能等研究提供了重要的实验材料。