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甘蔗黄叶病毒P0蛋白基因细菌双杂交诱饵载体的构建和自激活鉴定

文献类型： 中文期刊

作者： 杨文君 1 ; 余乃通 2 ; 张雨良 2 ; 王健华 2 ; 谢慧敏 3 ;

作者机构： 1.海南大学环境与植物保护学院

2.中国热带农业科学院热带生物技术研究所

3.雅安职业技术学院

关键词： 甘蔗黄叶病毒;P0蛋白基因;细菌双杂交;诱饵质粒;构建

期刊名称： 基因组学与应用生物学

ISSN： 1674-568X

年卷期： 2015 年 34 卷 04 期

页码： 836-841

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 由甘蔗黄叶病毒所引起的甘蔗黄叶病是甘蔗生产中潜在的重要病毒病害之一。该病毒属黄症病毒科(Luteoviridae)中的马铃薯卷叶病毒属(Poleroviruses)。根据甘蔗黄叶病毒海南分离物(SCYLV-CHN-HN1)全基因组序列(Gen Bank No.HQ342888),设计P0蛋白基因的一对特异性引物P0-Bait F/P0-Bait R。以实验室保存的重组质粒p MD18T-P0为DNA模板,PCR扩增P0蛋白基因。然后将P0蛋白基因和细菌双杂交诱饵质粒p BT分别进行双酶切后,连接构建重组诱饵质粒p BT-P0。经PCR扩增、双酶切鉴定和序列分析,表明获得了细菌双杂交重组诱饵载体p BT-P0,且编码框正确。将重组载体p BT-P0转化细菌双杂交系统Bacterio Match RⅡScreening Reporter感受态细胞,进行自激活和毒性验证。结果显示p BT-P0重组载体在细菌双杂交系统中无自激活作用及毒性作用,表明本试验构建的p BT-P0可应用于该系统筛选与之互作的寄主蛋白。

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