文献类型： 中文期刊

作者： 谷莉 ¹ ; 郑玉东 ² ; 张翔 ¹ ; 白昌明 ² ; 刘金兰 ¹ ; 辛鲁生 ² ; 李晨 ² ; 王崇明 ² ;

作者机构： 1.天津农学院水产学院

2.中国水产科学研究院黄海水产研究所

关键词： 杂色鲍;鲍疱疹病毒;原位LAMP;检测方法

期刊名称： 水产学报

ISSN： 1000-0615

年卷期： 2022 年 46 卷 005 期

页码： 885-894

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为精确定位鲍疱疹病毒(HaHV-1)在宿主不同组织器官中的分布,明确HaHV-1的组织亲嗜性和侵染进程,实验基于环介导等温扩增技术(LAMP)和原位杂交技术建立了HaHV-1的原位LAMP检测方法.利用该方法研究了HaHV-1人工感染实验不同时间节点,病毒在杂色鲍主要器官的分布规律和组织亲嗜性.并对已报道的HaHV-1 LAMP扩增引物进行优化,实现对载玻片上原位固定靶组织内病毒DNA的稳定、特异扩增,筛选最佳显色时间等原位杂交反应条件,最后通过免疫酶标技术分析HaHV-1在组织样本内的分布情况.结果显示,HaHV-1原位LAMP检测方法最适显色时间为60 min.利用该方法对攻毒后24、36、48、60和72 h,HaHV-1在杂色鲍外套膜、鳃、肝胰腺和腹足神经节4种样本的组织分布情况进行检测和分析.病毒阳性信号最早于36 h出现在腹足神经节,48 h在部分外套膜样本中观察到病毒阳性信号,分布局限于外周神经中.在感染实验后期,病毒阳性信号出现在肝胰腺结缔组织中.病毒阳性信号出现的部位常有大量细胞渗出和浸润,渗出的细胞中可见被病毒感染的血淋巴细胞.本研究建立的HaHV-1原位LAMP检测方法,同步实现了高灵敏度和精确定位的功能.该检测方法适用于病毒感染的确诊、不同组织器官的亲嗜性、病毒侵染途径和致病机理等相关研究.