文献类型： 中文期刊

作者： 曹书华 ¹ ; 魏茂乐 ² ; 李永仁 ¹ ; 黄博闻 ² ; 辛鲁生 ² ; 白昌明 ² ; 王崇明 ² ;

作者机构： 1.天津农学院水产学院

2.中国水产科学研究院黄海水产研究所

关键词： 牡蛎疱疹病毒;核衣壳蛋白;真核表达系统;蛋白多聚化

期刊名称： 水产学报

ISSN： 1000-0615

年卷期： 2024 年 005 期

页码： 65-74

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 牡蛎疱疹病毒（OsHV-1）在全球范围内导致牡蛎、扇贝与蚶类的大规模死亡，成为双壳贝类养殖产业的重要威胁。为了解OsHV-1的结构与致病机制。本研究利用人胚胎肾细胞（HEK293t），构建OsHV-1主要核衣壳蛋白（ORF104和ORF33）的真核表达系统，并对ORF104和ORF33潜在相互作用进行分析。实验首先通过特异性PCR扩增技术得到orf 104和orf 33的基因序列，根据其编码蛋白的理化性质、跨膜区与三维结构等生物信息学分析结果，选择pCDNA3.1（+）构建两种基因的重组表达质粒。重组质粒经大肠杆菌扩增、提取后，利用转染试剂Lipo8000?将pCDNA3.1（+）-orf 104与pCDNA3.1（+）-orf 33分别单独或共转染至HEK293t。然后，将转染后的细胞培养18 h后裂解收集蛋白。最后利用蛋白免疫印迹（Western blot,WB）与负染电镜检测两种目的蛋白的表达情况。结果显示，实验成功构建了OsHV-1衣壳蛋白ORF104和ORF33的重组表达质粒载体，通过真核细胞表达得到大小约为135与35 ku的目的蛋白。研究表明，表达质粒可在真核表达系统中实现蛋白单独转染与共转染，共转染蛋白间可能存在相互作用的趋势并形成多聚体，其中，ORF33自身即可形成分子质量不同的多聚体。本研究首次利用真核表达系统开展OsHV-1关键结构蛋白的表达，为进一步开展该病毒结构蛋白功能与互作，以及病毒入侵机制研究奠定基础。