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用P. pastoris的pAOX1表达系统表达木糖异构酶

文献类型： 中文期刊

作者： 易国辉 1 ; 尹慧祥 2 ; 张爱联 2 ;

作者机构： 1.海南医学院

2.中国热带农业科学院

关键词： 木糖异构酶;P. pastoris;pAOX1

期刊名称： 生物技术

ISSN： 1004-311X

年卷期： 2011 年 21 卷 01 期

页码： 17-19

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 目的:应用P. pastoris的pAOX1表达系统分泌表达重组木糖异构酶。方法:用PCR法从大肠杆菌基因组中扩增木糖异构酶基因(xi)。用EcoRⅠ和NotⅠ双酶切将其基因克隆进P. pastoris表达载体。通过电转法将其木糖异构酶基因重组于P. pastoris基因组,筛选G418抗性700μg/ml的重组子作为工程菌GS115(pPIC9K-xi)。在摇瓶中发酵用甲醇诱导表达重组木糖异构酶。用SDS-PAGE分析重组蛋白的表达情况,用糖酵解法对表达产物进行活性分析。结果:木糖异构酶基因在pAOX1的调控下,在P. pastoris中经甲醇诱导能分泌表达,摇瓶发酵2d表达量为35mg/L,表达产物具有代谢木糖的作用。结论:成功地克隆了大肠杆菌的木糖异构酶基因,并实现用pAOX1系统在P. pastoris中表达中木糖异构酶,为用P. pastoris规模化生产重组木糖异构酶奠定了基础。

  • 相关文献

[1]Yeast expressed foldable quadrivalent A beta 15 elicited strong immune response against A beta without A beta-specific T cell response in wild C57BL/6 mice. Tan, Lin,Zou, Juntao,Yao, Zhibin,Tan, Lin,Wang, Hao,Tan, Xin.

[2]Inducible expression of human angiostatin by AOXI promoter in P. pastoris using high-density cell culture. Zhang, Ai-Lian,Qu, Zhi,Yi, Guo-Hui,Su, Dong-Xiao,Tu, Fa-Zhi,Pan, Ying-Wen,Zhang, Tian-Yuan,Luo, Jin-Xian,Zhang, Tian-Yuan,Luo, Jin-Xian,Fu, Ce-Yi.

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