文献类型： 中文期刊

作者： 董世雷 ¹ ; 刘伟 ² ; 朱立颖 ² ; 王学琴 ³ ; 于宏伟 ⁴ ; 王欣 ² ;

作者机构： 1.浙江师范大学化学与生命科学学院

2.浙江省农业科学院植物保护与微生物研究所

3.内蒙古工业大学化工学院

4.马歇尔大学微生物学与免疫学院

关键词： OmpT;克隆与表达;外膜蛋白酶;抗菌肽

期刊名称： 中国农业科技导报

ISSN： 1008-0864

年卷期： 2011 年 13 卷 02 期

页码： 59-64

收录情况： CSCD

摘要： OmpT(Outer-membrane proteases T)是革兰氏阴性细菌分泌到细胞表面具有丝氨酸蛋白酶活性的一种重要蛋白。利用大肠杆菌OmpT降解抗菌肽特性来筛选和改造新型抗菌肽,可以为开发抗OmpT蛋白酶水解新抗菌肽序列提供新的思路和创造条件。根据大肠杆菌外膜蛋白酶OmpT的基因序列设计一对引物,应用聚合酶链式反应(PCR)方法,从大肠杆菌K12基因组中扩增获得一段为954 bp的序列,测序结果显示此序列与已公布序列同源性达99.99%。将其序列定向克隆到原核表达载体pET28a上构建重组表达质粒pET28a-OmpT。经IPTG诱导后,在表达宿主菌中特异性的表达出分子量约为36 kDa且具有生物活性的OmpT蛋白。生长曲线试验显示,抗菌肽LL37对带重组表达质粒pET28a-OmpT的大肠杆菌生长没有影响,而对照组的生长明显受到抗菌肽的抑制作用。