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扁桃AcDHN1基因的克隆及原核表达分析

文献类型： 中文期刊

作者： 王敏 1 ; 李疆 2 ; 李鹏 3 ; 田嘉 2 ; 罗淑萍 2 ;

作者机构： 1.新疆农业科学院园艺作物研究所

2.新疆农业大学

3.中国农业科学院果树研究所

关键词： 扁桃;AcDHN1;原核表达

期刊名称： 新疆农业科学

ISSN： 1001-4330

年卷期： 2020 年 57 卷 012 期

页码： 2221-2229

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： [目的]克隆与分析扁桃脱水素基因,为研究脱水素基因在扁桃抗逆机制中发挥的功能提供参考.[方法]以新疆栽培的扁桃品种'纸皮'叶片为材料,通过PCR技术克隆扁桃AcDHN1基因并对该基因进行原核表达分析,构建原核表达载体,在大肠杆菌进行表达.[结果]克隆得到了一个脱水素基因,命名为Ac-DHN1,GenBank登陆号为KT949395,该基因全长924 bp、编码308个氨基酸的多肽,为稳定的亲水性蛋白,属于Y2 Kn型脱水素,推测蛋白分子质量为32.4 kD,亚细胞定位于细胞核中.将该基因与原核表达载体连接构建重组质粒pET-AcDHN1,然后将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达.SDS-PAGE电泳结果表明,该蛋白分子量的大小约为52.7 kD,与预期长度一致.[结论]对重组蛋白的诱导条件进行优化后结果显示,该基因在IPTG浓度0.1 mmol/L、诱导3 h表达量最佳.

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