文献类型： 中文期刊
作者： 魏蔷 1 ; 白怡霖 1 ; 柴书军 1 ; 刘运超 1 ; 宋亚鹏 1 ; 张改平 1 ;
作者机构： 1.河南省农业科学院动物免疫学重点实验室/河南省动物免疫学重点实验室/农业部动物免疫学重点实验室;西北农林科技大学动物医学院;河南农业大学牧医工程学院;江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心
关键词： 猪瘟病毒;E~(rns)蛋白;分泌表达;糖基化分析;活性;杆状病毒
期刊名称： 河南农业科学
ISSN： 1004-3268
年卷期： 2020 年 02 期
页码： 136-141
收录情况： 北大核心
摘要： 为制备用于ELISA检测猪瘟病毒的E~(rns)蛋白,根据昆虫细胞密码子偏好性对E~(rns)的基因序列进行优化,将优化后的E~(rns)基因插入带有信号肽的表达载体pFastBacl-gp67中;随后将重组质粒pFastBacl-gp67-E~(rns)转化至DH10Bac感受态细胞,经蓝白斑筛选,挑选白斑,提取重组黏粒Bacmid-E~(rns);将重组黏粒转染sf21细胞得到杆状病毒,经扩增后得到P_3病毒,利用其大量感染细胞,3 d后收取细胞培养上清;通过镍填料纯化得到分泌表达的E~(rns)蛋白,通过SDS-PAGE及Western blot检测分泌蛋白的表达水平、纯化情况,用PNGase F处理分析其糖基化水平,通过ELISA分析其抗原性。结果显示,成功构建了重组质粒pFastBacl-gp67-E~(rns),蓝白斑筛选获得了重组黏粒Bacmid-E~(rns),在此基础上获得了重组杆状病毒,利用其感染sf21细胞,成功分泌表达了E~(rns)蛋白,纯化所得E~(rns)蛋白纯度较高,具有较高糖基化修饰水平,且纯化所得E~(rns)蛋白能特异性识别猪瘟阳性血清,其抗原性良好。
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