文献类型： 中文期刊

作者： 薛正飞 ¹ ; 滕蔓 ² ; 李会珍 ² ; 马圣明 ² ; 宋利娜 ² ; 张雅 ² ; 罗俊 ² ; 张改平 ³ ;

作者机构： 1.河南农业大学生命科学学院;河南省农业科学院动物免疫学重点实验室农业部动物免疫学重点实验室河南省动物免疫学重点实验室;河南科技大学动物科技学院动物疫病与公共安全重点实验室

2.;河南农业大学生命科学学院;河南省农业科学院动物免疫学重点实验室农业部动物免疫学重点实验室河南省动物免疫学重点实验室;河南科技大学动物科技学院动物疫病与公共安全重点实验室

3.;河南农业大学生命科学学院;河南省农业科学院动物免疫学重点实验室农业部动物免疫学重点实验室河南省动物免疫学重点实验室;河南科技大学动物科技学院动物疫病与公共安全重点实验室;

关键词： 马立克病病毒;hybrid-PCR;miR-M4-5p;cDNA文库;宿主靶基因;肿瘤发生

期刊名称： 畜牧兽医学报

ISSN： 0366-6964

年卷期： 2018 年 02 期

页码： 348-359

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 马立克病病毒(MDV)是少数感染自然宿主后可诱发淋巴瘤的疱疹病毒之一,是研究肿瘤发生及发展的理想动物模型。目前已报道MDV可编码数十种miRNA,其中MDV-1编码的miR-M4-5p被鉴定为宿主细胞miR-155的同源物,由于miR-155与人类多种肿瘤性疾病密切相关,这意味着miR-M4-5p可能在MDV的致瘤过程中扮演重要角色。本研究旨在构建miR-M4-5p的宿主靶基因文库并进行初步鉴定。提取鸡胚成纤维细胞(CEF)总RNA,反转录合成cDNA,用hybrid-PCR扩增候选靶基因片段连接到pMD19-T载体,转化大肠杆菌JM109感受态细胞后挑选单克隆进行PCR鉴定及测序,通过BLAST比对分析,共获得88个宿主候选靶基因序列。优先选择miRNA结合靶点位于mRNA 3′-UTR且与miR-M4-5p种子序列(2~7nt)完全互补配对的29个候选靶基因,构建报告基因载体进行双荧光素酶报告试验,通过三轮双荧光素酶报告试验最终初步鉴定5个宿主靶基因:PRICKLE1、COLA、BCAT1、ANTXR1和TECPR1,为进一步揭示miR-M4-5p的分子调控机制奠定了重要基础。