文献类型： 中文期刊

作者： 牛香香 ¹ ; 李雪洋 ¹ ; 许倩茹 ² ; 李青梅 ³ ; 王雅楠 ⁴ ; 张申立 ¹ ; 马强 ⁵ ; 张二芹 ¹ ; 张改平 ¹ ;

作者机构： 1.河南农业大学动物医学院

2.西北农林科技大学动物医学院

3.河南省农业科学院

4.吉林大学白求恩医学部

5.河南省农业科学院畜牧兽医研究所

关键词： 转基因水稻;HA蛋白;离子交换层析;疏水层析;亲和层析

期刊名称： 农业生物技术学报

ISSN：

年卷期： 2021 年 007 期

页码： 1237-1247

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 血凝素（hemagglutinin, HA）蛋白是禽流感病毒（Avian influenza virus, AIV）表面的一种糖蛋白,能诱导机体产生中和抗体,也是AIV主要的保护性抗原。已在水稻（Oryza sativa）胚乳中成功表达禽流感病毒H9N2 HA蛋白。为了建立水稻源禽流感病毒H9N2亚型HA蛋白的纯化方法,本研究分别采用两种方法进行HA蛋白的纯化。方法一:将HA蛋白水稻粉末按照质量与体积1∶5比例加入到提取液中,室温下搅拌,离心、取上清液,过滤后,首先经Q阴离子层析捕获到HA粗提蛋白,其次利用HA蛋白抗体亲和层析精细纯化HA蛋白,收集洗脱液,检测目的蛋白;方法二:用与方法一同样的方法获得HA粗提蛋白,根据Butyl疏水填料特性,HA粗提蛋白液中加入硫酸铵,搅拌、离心和过滤,进行第2步纯化,将收集到的洗脱液浓缩、换液,再经过SP阳离子层析纯化,收集洗脱液,获得HA蛋白。将两种方法纯化的HA蛋白经过SDS-PAGE和Western blot检测蛋白的纯度,并将HA蛋白送公司测序。结果表明,方法一:Q阴离子层析与HA免疫抗体亲和层析两种组合纯化HA蛋白的纯度约为90%左右。该组合纯化蛋白的方法相对简单,但需要培养和纯化单克隆抗体,此方法适合实验室快速小规模的蛋白纯化;方法二:Q阴离子层析、Butyl疏水层析和SP阳离子层析3种组合纯化的HA蛋白纯度达到90%左右。该方法适合建立HA蛋白的纯化工艺,用于大规模纯化HA蛋白。这两种方法获得的HA蛋白经测序与已知的氨基酸序列一致。本研究首次建立2种从水稻中获得高纯度重组H9N2亚型HA蛋白的方法,为今后制备禽流感H9N2亚型亚单位疫苗提供基础资料。