文献类型： 中文期刊

作者： 赵艺越 ¹ ; 马勋 ¹ ; 郝科兴 ¹ ; 王正荣 ² ; 王静 ¹ ; 薄新文 ² ;

作者机构： 1.石河子大学科技学院

2.新疆农垦科学院畜牧兽医研究所/省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室

关键词： 犬小肠上皮细胞;原代培养;纯化

期刊名称： 畜牧与兽医

ISSN： 0529-5130

年卷期： 2022 年 54 卷 010 期

页码： 52-57

收录情况： 北大核心

摘要： 旨在建立原代犬小肠上皮细胞分离培养及纯化的方法,为犬肠道病毒性、细菌性及寄生虫相关疾病研究提供细胞材料.采用组织块培养法分离培养原代犬小肠上皮细胞,胰酶差速消化法进行纯化,利用细胞形态学、间接免疫荧光法鉴定上皮细胞特性,脂多糖(LPS)刺激原代上皮细胞,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法检测炎性因子转录水平,鉴定原代犬小肠上皮细胞的功能.结果显示:组织块培养法获得的原代犬小肠上皮细胞可在24 h内贴壁,第3天细胞开始增殖,第4天时达到增殖顶峰,第5~7天细胞活性逐渐降低,在体外连续传代可培养至第10代.经胰蛋白酶差速消化纯化后,获得铺路石样原代犬小肠上皮细胞,生长曲线类似"S"形,上皮细胞特异性细胞角蛋白18(CK18)鉴定呈阳性,LPS可诱导犬小肠原代上皮细胞炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素10(IL-10)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的转录水平在12h(P<0.05)、24 h(P<0.01)表达量呈显著和极显著差异.研究表明,利用组织块培养法可成功分离获得数量较多、纯度较高且具有典型上皮细胞形态和功能的犬小肠上皮细胞,获得的细胞为研究犬肠道疾病致病机理和相关研究提供了细胞模型.