文献类型： 中文期刊
作者： 张春玲 1 ; 王瑞阳 1 ; 钱忠辉 1 ; 赵本进 1 ; 张俊平 1 ; 葛宇燕 1 ; 张子悦 1 ; 丁卫星 1 ;
作者机构： 1.上海市农业科学院畜牧兽医研究所
关键词： 猪圆环病毒ORF2基因;密码子优化;稀有密码子;自身信号肽;毕赤酵母
期刊名称： 上海农业学报
ISSN： 1000-3924
年卷期： 2024 年 40 卷 004 期
页码： 81-85
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 为了在毕赤酵母中高效表达PCV2ORF2基因,对PCV2ORF2基因编码的187个氨基酸密码子进行毕赤酵母偏爱性优化,利用两步PCR全化学合成优化后的ORF2基因。将优化前后的PCV2ORF2基因片段插入毕赤酵母表达载体pPICZα-C,构建重组质粒pPICZα-C-ORF2和p PICZα-C-ORF2op。将线性化的重组质粒电转化毕赤酵母GS115,并筛选Zeocin抗性重组子。同时,也研究了信号肽对PCV2ORF2表达效率的影响。SDS-PAGE和Western-blot分析结果表明,只有经密码子优化且去除ORF2基因自身信号肽的重组子能够分泌表达PCV2 ORF2蛋白,目的蛋白分子质量约为30 ku,表达的重组ORF2蛋白可被PCV2阳性血清识别,具有生物学活性。
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