文献类型： 中文期刊

作者： 金虎 ¹ ; 戴科科 ¹ ; 汪汇慧 ² ; 李震 ¹ ; 段作营 ¹ ; 史仲平 ¹ ;

作者机构： 1.江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室

2.上海市农业科学院畜牧兽医研究所

关键词： 毕赤酵母;猪-α干扰素;甲醇代谢;诱导温度;转录

期刊名称： 工业微生物

ISSN： 1001-6678

年卷期： 2011 年 41 卷 06 期

页码： 52-57

收录情况： CSCD

摘要： 以一株表达猪-α干扰素(pIFN-α)重组毕赤酵母为研究对象,考察了诱导温度对pIFN-α表达、细胞代谢活性及甲醇代谢关键酶的影响。在5 L发酵罐开展毕赤酵母高密度流加培养生产表达pIFN-α研究,利用实时PCR技术对不同诱导温度、诱导稳定期的胞内甲醇代谢关键酶(包括解毒酶)基因转录水平进行定量分析。低温(20℃)可以同时提高细胞的代谢活性和猪-α干扰素的表达水平,低温(20℃)下最高pIFN-α抗病毒活性达到5.57×10~6IU/mL,是30℃常温诱导下最高抗病毒活性(2.9×10~5IU/mL)的19.2倍;相比于30℃常温诱导,20℃下醇氧化酶(AOX)、甲醛脱氢酶(FLD)、甲酸脱氢酶(FDH)、过氧化氢酶(CAT)及二羟基丙酮合成酶(DHAS)基因的转录水平明显提高,其中CAT和DHAS转录水平的增加尤为显著。低温诱导提高pIFN-α表达原因在于:(1)甲醇利用速度快,细胞代谢活性强;(2)低温诱导下甲醛产能途径和解毒能力得到加强,为合成细胞物质提供更多的能量;(3)甲醛同化途径关键酶(DHAS)转录水平在低温下增强更为显著,促使更多的碳流向细胞合成和外源蛋白表达。