文献类型： 中文期刊

作者： 刘蓓蓓 ¹ ; 韦艳娜 ¹ ; 陈蓉 ¹ ; 谢星 ¹ ; 倪博 ¹ ; 郝飞 ¹ ; 张珍珍 ¹ ; 白昀 ¹ ; 袁厅 ¹ ; 冯志新 ¹ ;

作者机构： 1.江苏省农业科学院兽医研究所/农业农村部兽用生物制品工程重点实验室

关键词： 非洲猪瘟病毒;pA104蛋白;单克隆抗体;半固体培养法

期刊名称： 江苏农业学报

ISSN： 1000-4440

年卷期： 2024 年 004 期

页码： 682-689

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了快速、高效制备非洲猪瘟病毒（ASFV）单克隆抗体，本研究通过大肠杆菌系统表达并纯化了ASFV重组蛋白pA104R。以ASFV重组蛋白pA104R为抗原，分别比较了CpG ODN联合氢氧化铝佐剂和常规弗氏佐剂两种免疫策略，并重点比较半固体培养法和常规有限稀释法来制备ASFV pA104R单克隆抗体的效率。结果显示，本研究获得了相对分子质量为3.5×10~4的ASFV重组可溶性蛋白pA104R,通过其与CpG ODN联合氢氧化铝佐剂免疫小鼠，在第21 d即可达到融合要求，本试验方法（重组蛋白pA104R与CpG ODN联合氢氧化铝佐剂免疫）较重组蛋白pA104R与常规弗氏佐剂免疫节省14 d时间。通过半固体培养法筛选单克隆的试验周期比有限稀释法缩短28 d,并减少了亚克隆的工作量。半固体培养法获得5株阳性杂交瘤细胞，挑选效价较高的3株（9A4、9H6、11F5）进行鉴定，重链均为IgG,轻链均为KAPPA。纯化后的3株单克隆抗体针对pA104蛋白和全病毒蛋白质的效价分别达1∶160 000～1∶320 000和1∶200～1∶400。本研究优选了CpG ODN联合氢氧化铝佐剂结合半固体培养法筛选pA104R的单克隆抗体，为单克隆抗体制备提供了快速高效的新策略。