文献类型： 中文期刊

作者： 王吉英 ¹ ; 尹蕊如 ² ; 谢星 ² ; 王海燕 ³ ; 刘胡栋 ⁴ ; 胡辉 ⁵ ; 熊祺琰 ² ; 冯志新 ² ; 邵国青 ² ; 于岩飞 ² ;

作者机构： 1.湖南农业大学动物医学院

2.江苏省农业科学院兽医研究所

3.兽用生物制品(泰州)国泰技术创新中心

4.湖南医药学院医学人文与信息管理学院

5.怀化职业技术学院动物科技学院

关键词： 猪肺炎支原体（Mhp）;乳酸脱氢酶（LDH）;猪支气管上皮细胞（PBEC）;凋亡

期刊名称： 畜牧兽医学报

ISSN： 0366-6964

年卷期： 2024 年 005 期

页码： 2195-2205

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 猪肺炎支原体感染会引起宿主上皮细胞的损伤及凋亡。上皮屏障的破坏往往导致细菌和病毒的继发感染，给养猪业造成严重的经济损失，但具体的致病机制及毒力因子尚未完全阐明。前期研究发现猪肺炎支原体乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase, LDH）不仅参与猪肺炎支原体的代谢还与猪肺炎支原体的毒力相关。因此，本研究通过原核表达及亲和层析获得猪肺炎支原体乳酸脱氢酶重组蛋白（recombinant LDH, rLDH）,之后分别用不同浓度的rLDH与猪支气管上皮细胞（porcine bronchial epithelial cell, PBEC）孵育，经显微镜观察rLDH对细胞形态的影响，通过CCK-8法检测rLDH对细胞活力的影响。选取对细胞形态及活力影响不显著的50和100μg·mL^-1 rLDH分别与PBEC孵育，通过流式细胞仪检测细胞凋亡率，反转录荧光定量PCR（reverse transcription-quantitative polymerase chain reaction, RT-qPCR）法和免疫印记检测凋亡相关基因caspase 3、caspase 8、caspase 9、Bax、BCL-2的转录水平和蛋白水平。结果显示：猪肺炎支原体rLDH呈剂量依赖性地诱导PBEC凋亡，其作用与猪肺炎支原体菌株一致。用rLDH及Mhp 168孵育后，PBEC的促凋亡因子Bax、caspase 3和caspase 9的mRNA水平显著上调，凋亡抑制因子BCL-2的mRNA水平显著下调，caspase 8的mRNA水平未发生显著变化。促凋亡因子Bax、caspase 3的蛋白表达水平显著上调，凋亡抑制因子BCL-2的蛋白表达水平显著下调。结果表明，猪肺炎支原体可能通过LDH诱导PBEC内源性细胞凋亡，凋亡相关因子caspase 3、caspase 9、Bax和BCL-2在其中发挥重要作用。