文献类型： 中文期刊

作者： 秦炜 ¹ ; 张宇 ² ;

作者机构： 1.湖北民族大学附属民大医院制剂室

2.湖北省农业科学院中药材研究所

关键词： 黄芪多糖;糖尿病肾病;足细胞;铁死亡;线粒体

期刊名称： 中医学报

ISSN： 1674-8999

年卷期： 2025 年 40 卷 002 期

页码： 236-247

摘要： 目的：探讨黄芪多糖（astragalus polysaccharide, APS）对糖尿病肾病（diabetic nephropathy, DN）足细胞铁死亡介导线粒体损伤的调控机制。方法：以高糖（high glucose, HG）干预人肾小球足细胞（human podocyte cell, HPC）构建DN损伤模型。将HPC细胞分为对照组（Control）、模型组(HG,30 mmol·L^-1葡萄糖)、APS低剂量组(APS-L,30 mmol·L^-1葡萄糖+0.4 g·L^-1 APS)、APS高剂量组(APS-H,30 mmol·L^-1葡萄糖+1.2 g·L^-1 APS)、铁死亡激活剂组(Erastin, 30 mmol·L^-1葡萄糖+1.2 g·L^-1 APS+5μmol·L^-1 Erastin)。采用细胞活性染色实验检测存活率，AO/EB双重染色实验检测细胞凋亡率，MitoTracker Red CMXRos染色实验检测线粒体完整性，Rh123染色实验检测线粒体膜电位（mitochondrial membrane potential, MMP）,DCFH-DA染色实验检测活性氧（reactive oxygen species, ROS）含量，FerroOrange染色实验检测铁离子含量。采用qRT-PCR实验检测细胞过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子-1α（peroxisome proliferator-activated receptor γ coactivator-1α,PGC-1α）、线粒体转录因子A（transcription factor A,mitochondrial, TFAM）、谷胱甘肽过氧化酶4（glutathione peroxidase 4,GPX4）、SLC7A11、Nephrin、Podocin、B淋巴细胞瘤-2（B-cell lymphoma-2,Bcl-2）、Bax基因表达水平。采用免疫荧光实验检测细胞PGC-1α、TFAM表达水平，免疫组化实验检测细胞GPX4、SLC7A11表达水平,Western blot实验检测细胞Nephrin、Podocin、Bcl-2、Bax表达水平。结果：与Control组比较，HG组细胞存活率、完整线粒体比例、MMP降低，凋亡率、ROS含量、铁离子含量升高（P<0.05）;与HG组比较，APS-L组、APS-H组、Erastin组细胞存活率、完整线粒体比例、MMP升高，凋亡率、ROS含量、铁离子含量降低（P<0.05）;与APS-L组比较，APS-H组细胞存活率、完整线粒体比例、MMP升高，凋亡率、ROS含量、铁离子含量降低（P<0.05）;与APS-H组比较，Erastin组细胞存活率、完整线粒体比例、MMP降低，凋亡率、ROS含量、铁离子含量升高（P<0.05）。qRT-PCR显示，与Control组比较，HG组细胞PGC-1α、TFAM、GPX4、SLC7A11、Nephrin、Podocin、Bcl-2基因表达水平降低，Bax基因表达水平升高（P<0.05）。与HG组比较，APS-L组、APS-H组、Erastin组细胞PGC-1α、TFAM、GPX4、SLC7A11、Nephrin、Podocin、Bcl-2基因表达水平升高，Bax基因表达水平降低（P<0.05）。与APS-L组比较，APS-H组细胞PGC-1α、TFAM、GPX4、SLC7A11、Nephrin、Podocin、Bcl-2基因表达水平升高，Bax基因表达水平降低（P<0.05）。与APS-H组比较，Erastin组细胞PGC-1α、TFAM、GPX4、SLC7A11、Nephrin、Podocin、Bcl-2基因表达水平降低，Bax基因表达水平升高（P<0.05）。免疫荧光显示，与Control组比较，HG组细胞PGC-1α、TFAM表达水平降低（P<0.05）。与HG组比较，APS-L组、APS-H组、Erastin组细胞PGC-1α、TFAM表达水平升高（P<0.05）。与APS-L组比较，APS-H组细胞PGC-1α、TFAM表达水平升高（P<0.05）。与APS-H组比较，Erastin组细胞PGC-1α、TFAM表达水平降低（P<0.05）。免疫组化显示，与Control组比较，HG组细胞GPX4、SLC7A11阳性表达细胞比例降低（P<0.05）。与HG组比较，APS-L组、APS-H组、Erastin组细胞GPX4、SLC7A11阳性表达细胞比例升高（P<0.05）。与APS-L组比较，APS-H组细胞GPX4、SLC7A11阳性表达细胞比例升高（P<0.05）。与APS-H组比较，Erastin组细胞GPX4、SLC7A11阳性表达细胞比例降低（P<0.05）。Western blot显示，与Control组比较，HG组细胞Nephrin、Podocin、Bcl-2蛋白表达水平降低，Bax蛋白表达水平升高（P<0.05）。与HG组比较，APS-L组、APS-H组、Erastin组细胞Nephrin、Podocin、Bcl-2蛋白表达水平升高，Bax蛋白表达水平降低（P<0.05）。与APS-L组比较，APS-H组细胞Nephrin、Podocin、Bcl-2蛋白表达水平升高，Bax蛋白表达水平降低（P<0.05）。与APS-H组比较，Erastin组细胞Nephrin、Podocin、Bcl-2蛋白表达水平降低，Bax蛋白表达水平升高（P<0.05）。结论：APS可减轻DN足细胞线粒体损伤，降低足细胞凋亡率，这可能与抑制足细胞铁死亡有关。