文献类型： 中文期刊

作者： 李青梅 ¹ ; 郭军庆 ¹ ; 孟泽锟 ² ; 李艳华 ¹ ; 刘肖 ¹ ; 石建州 ¹ ; 李鸽 ² ; 柴书军 ¹ ; 罗俊 ¹ ; 邓瑞广 ¹ ; 张改平 ¹ ;

作者机构： 1.河南省农业科学院

2.河南农业大学动物医学院

关键词： H9N2亚型禽流感病毒;单克隆抗体;血凝抑制;病毒中和;免疫层析试纸条

期刊名称： 中国畜牧兽医

ISSN： 1671-7236

年卷期： 2021 年 48 卷 010 期

页码： 3761-3769

收录情况： 北大核心

摘要： 为建立H9N2亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)免疫层析快速检测技术,本研究以差速离心法纯化H9N2亚型AIV免疫BALB/c小鼠,将免疫小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行细胞融合和HAT选择性培养;以H9N2亚型AIV感染MDCK细胞建立异源免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPM A)的单克隆抗体检测方法,通过对杂交瘤细胞的IPMA筛选和连续克隆化筛选鉴定抗H9N2亚型AIV中和性单克隆抗体;以胶体金标记HA单克隆抗体,配对HA单克隆抗体和羊抗小鼠IgG为检测线和质控线,制备H9N2亚型AIV快速检测试纸条,测定其特异性和敏感性.结果显示,获得了11株稳定分泌抗H9N2亚型AIV单克隆抗体的杂交瘤细胞,其单克隆抗体腹水IPMA效价在1.28×10-4至2.56×10-5之间.单克隆抗体3A2、5H6、6B8、7E10和9G12血凝抑制试验(HI)显示血凝抑制活性,其(HI)效价在61og2~91og2之间.单克隆抗体3A2、6B8和9G12在病毒中和试验中对H9N2亚型AIV有显著病毒中和活性,中和效价分别1 ∶ 6 400、1 ∶ 25 600和1 ∶ 25 600.Western blotting结果提示,该中和单克隆抗体识别HA蛋白线性抗原表位.利用配对单克隆抗体3A2和9G12研制的H9N2亚型AIV检测试纸条检测H9N2亚型AIV尿囊液的效价为9log2,灵敏度与经典血凝试验(HA)相当,与其他亚型AIV(H1、H3、H5、H7),以及新城疫病毒和鸡传染性法氏囊病病毒等相关病毒均无交叉反应.本研究制备了具有病毒中和活性的抗H9N2亚型AIV单克隆抗体,并初步研制了 H9N2亚型AIV检测试纸条,为H9N2亚型AIV新型疫苗研制和快速检测奠定良好的研究基础.