文献类型： 中文期刊

作者： 张莉 ¹ ; 任卫科 ² ; 李秀丽 ³ ; 路超 ³ ; 王利丽 ³ ; 郑丽 ³ ; 池晶晶 ³ ; 田向学 ³ ; 韩伟 ³ ; 鄢明华 ³ ;

作者机构： 1.农业部兽用药物与诊断技术天津科学观测实验站

2.天津市畜牧兽医研究所

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关键词： 猪伪狂犬病病毒;聚合酶链反应;横向流动试纸条

期刊名称： 动物医学进展

ISSN： 1007-5038

年卷期： 2018 年 011 期

页码： 35-40

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 旨在将PCR技术与可视化的横向流动试纸条(lateral flow dipstick,LFD)相结合,建立猪伪狂犬病病毒野毒株的PCR-LFD快速检测技术.依据猪伪狂犬病病毒gE基因保守区域设计2条特异性引物和对应的特异性探针,其中下游引物和探针分别标记了荧光素(FITC)和生物素(Biotin).通过对PCR退火温度、引物浓度、探针杂交温度的筛选,确定PCR-LFD方法的最佳反应条件,并对其敏感性、特异性和重复性进行检测.结果显示,所建立的检测方法能够特异性的检测出猪伪狂犬病病毒野毒株,与猪伪狂犬病病毒Bartha-K61株、6种对照病毒和3种对照细菌均无交叉反应,其最低检测限为100TCID50/100μL.该方法对同批次和不同批次猪伪狂犬病病毒DNA分别进行5次重复检测,结果完全一致.该方法对50份临床样品进行检测,PCR-LFD方法和病毒分离培养法检测出16份阳性样品,常规PCR检测出14份阳性样品,PCR-LFD方法的敏感性高于PCR,但两者间差异不显著P>0.05.以上结果表明,所建立的方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,且不需要琼脂糖凝胶电泳可直接判读结果,适合养殖场、基层实验室的现场检测.