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番茄黄化曲叶病毒V2基因原核表达及多克隆抗体制备

文献类型： 中文期刊

作者： 季英华 1 ; 周晓伟 1 ; 蔡振东 1 ; 程兆榜 1 ; 周益军 1 ;

作者机构： 1.江苏省农业科学院植物保护研究所

关键词： 番茄黄化曲叶病毒;原核表达;多克隆抗体

期刊名称： 植物病理学报

ISSN： 0412-0914

年卷期： 2013 年 43 卷 02 期

页码： 143-148

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 通过PCR的方法,从番茄黄化曲叶病毒江苏分离物DNA中扩增到V2基因,并克隆到pMD18-T载体,序列测定结果显示其与报道的XH2分离物序列完全一致,核苷酸序列全长351 bp,编码115个氨基酸,推测分子量约13 kD。将该V2基因亚克隆到原核表达载体PET32a中获得重组表达载体PET32a-V2,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG可诱导1个分子量约为32 kDa的融合蛋白(含His标签)表达,经Ni+NTA亲和柱纯化,获得纯化的重组蛋白,免疫家兔制备TYLCV-V2蛋白的多克隆抗体Anti-V2,间接ELISA测定Anti-V2的效价达1∶655 360,Western blot及DIBA分析结果表明Anti-V2可与V2蛋白发生特异血清反应,可为进一步研究V2蛋白的功能提供参考。

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