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鲫鱼肝细胞分离与原代培养方法的优化

文献类型： 中文期刊

作者： 贾睿 1 ; 曹丽萍 2 ; 丁炜东 2 ; 杜金梁 2 ; 徐跑 1 ; 殷国俊 1 ;

作者机构： 1.南京农业大学无锡渔业学院

2.中国水产科学研究院淡水渔业研究中心

关键词： 鲫鱼;肝细胞;胰蛋白酶;原代培养

期刊名称： 华北农学报

ISSN： 1000-7091

年卷期： 2011 年 26 卷 S2 期

页码： 206-212

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 通过不同的分离方法和培养条件探索鲫鱼肝细胞的原代培养,以建立稳定的鲫鱼肝细胞原代培养模型。用台盼蓝染色检测细胞存活率;用WST-1检测细胞活力,同时观察长期培养过程中肝细胞的形态变化。结果显示:组织块培养4～5 d后肝细胞从组织块中迁出并增殖,但这种方法所需时间长且细胞不易收集;机械分散法收集的细胞少,细胞存活率低;而胰蛋白酶消化法获得良好稳定的分离和培养效果。用0.1%胰蛋白酶消化30 min,每克肝重可收集1.47×108个细胞,平均存活率为91.43%。培养基和血清浓度均会影响肝细胞的贴壁和生长。在含有10%(V/V)胎牛血清(FCS)M199培养基中,4%CO2、28℃,肝细胞培养8～9 d后传代。

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