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陆地棉黄萎病菌诱导抑制消减杂交cDNA文库的构建与分析

文献类型： 中文期刊

作者： 张映霞 1 ; 杨郁文 2 ; 倪万潮 2 ; 曹祥荣 1 ; 沈新莲 2 ;

作者机构： 1.南京师范大学生命科学学院

2.江苏省农业科学院农业生物技术研究所

关键词： 棉花;黄萎病;抑制消减杂交;cDNA文库

期刊名称： 江苏农业学报

ISSN： 1000-4440

年卷期： 2008 年 24 卷 01 期

页码： 17-21

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为探明棉花黄萎病抗性的相关基因,对本实验室的一个高抗黄萎病陆地棉材料进行抑制消减杂交(SSH),以黄萎病菌诱导后48 h和未诱导的植株分别作为Tester和D river,提取总RNA并分离mRNA,通过合成cDNA双链及两次PCR扩增,富集诱导后植株中差异表达的片段。对两次PCR后的产物纯化,连接并转化到大肠杆菌中完成文库构建,共获得了434个阳性克隆。对插入片段进行PCR扩增后发现大小从0.45 kb到0.70 kb不等。指纹图谱分析将所有克隆分为20类,于每一类中取1个克隆进行测序分析。BLAST分析表明大部分克隆片段与其他病原菌诱导缩减库中的EST相似。缩减片段编码的蛋白与拟南芥的P450单加氧酶、病程相关蛋白、类甜蛋白以及几丁质酶等相似。此cDNA文库的建立为进一步分析基因的差异表达及分离抗黄萎病基因奠定了基础。

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