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高密度发酵P.pastoris诱导表达egⅡ基因

文献类型： 中文期刊

作者： 尹慧祥 1 ; 易国辉 1 ; 屠发志 1 ; 张添元 1 ; 罗进贤 1 ; 张爱联 1 ;

作者机构： 1.中国热带农业科学院

关键词： 里氏木霉;葡聚糖内切酶;基因表达;P.pastoris;高密度发酵

期刊名称： 工业微生物

ISSN： 1001-6678

年卷期： 2011 年 41 卷 02 期

页码： 43-46

收录情况： CSCD

摘要： 用套叠PCR法扩增里氏木霉(Trichoderma reesei)的葡聚糖内切酶Ⅱ(egⅡ)基因。扩增基因经EcoR Ⅰ和Not Ⅰ双酶切后克隆进P.pastoris表达载体pPIC9k,获得重组表达质粒pPIC9K-egⅡ。通过电转法将egⅡ基因重组于P.pastoris基因组,筛选高G418抗性的转化子作为工程菌。工程菌的发酵在生物反应器中进行,在50 L的发酵罐中加入20 L发酵液。连续24 h补加甘油-PTM4增殖细胞,然后以甲醇为碳源诱导egⅡ基因表达48 h。放罐时生物量为A_(600)=203,重组EGⅡ产量为90 mg/L。表达产物具有酶解羧甲基纤维素的活性。

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