文献类型： 中文期刊

作者： 张靖鹏 ¹ ; 江锦秀 ¹ ; 林裕胜 ¹ ; 游伟 ¹ ; 刘道泉 ² ; 毛坤明 ³ ; 江斌 ¹ ; 胡奇林 ¹ ;

作者机构： 1.福建省农业科学院畜牧兽医研究所

2.福州市动物疫病预防控制中心

3.福建省福清市畜牧兽医技术服务中心

关键词： 山羊地方性鼻内肿瘤病毒;SYBR-GreenⅠ;荧光定量PCR

期刊名称： 福建农业学报

ISSN：

年卷期： 2021 年 007 期

页码： 779-784

收录情况： CSCD

摘要： 【目的】建立一种快速、敏感的ENTV-2检测方法,用于ENT的早期诊断与流行病学调查。【方法】通过生物信息学的方法将ENTV-2与ENTV-1、ERVs、JSRV进行比对,寻找ENTV-2的保守序列并设计1对特异性引物,建立SYBR-GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法,对所建立的PCR反应条件进行优化,将PCR扩增产物连接T载体构建的阳性质粒作为标准品,对SYBR-GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的特异性、敏感性和重复性进行验证。【结果】建立的检测ENTV-2 qPCR方法标准曲线呈现良好的线性关系（R²=0.992）;该方法的特异性良好,对ENTV-2可以产生特异性扩增曲线,与ENTV-2高度同源的ERVs没有交叉反应,也无法扩增羊口疮病毒（ORFV）、绵羊肺炎支原体（Mo）、丝状支原体山羊亚种（Mmc）等常见病原;敏感性良好,最低检测限度为7.5×10² copies·μL^-1,敏感性可达常规PCR检测方法的100倍;批内、批间的变异系数CV<1%,重复性良好;对81份临床样品的阳性检出率为17.3%。【结论】建立的SYBR-GreenⅠ实时荧光定量PCR方法特异性良好,敏感性较高,重复性良好,为山羊地方性鼻内肿瘤的早期、快速检测提供了技术支持。