文献类型： 中文期刊

作者： 江锦秀 ¹ ; 张靖鹏 ¹ ; 林裕胜 ¹ ; 刘维巍 ² ; 胡奇林 ¹ ; 万春和 ¹ ;

作者机构： 1.福建省农业科学院畜牧兽医研究所

2.福建农林大学动物科学学院(蜂学学院)

关键词： 绵羊肺炎支原体;Hsp70基因;TaqMan实时荧光定量PCR方法;序列分析

期刊名称： 畜牧兽医学报

ISSN： 0366-6964

年卷期： 2024 年 004 期

页码： 1684-1695

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 热休克蛋白70 （heat shock protein 70,Hsp70）是绵羊肺炎支原体（Mycoplasma ovipneumoniae, Movi）的重要膜蛋白，是机体内高度保守的生物分子，但在种间差异大，可作为分子生物学检测的候选靶区。为建立基于Hsp70基因的Movi通用型TaqMan实时荧光定量PCR（qPCR）检测方法，并进一步了解其遗传变异情况，本研究基于GenBank中Movi的Hsp70基因特征，设计特异性的引物及探针，建立了基于Hsp70基因的绵羊肺炎支原体qPCR检测方法。应用建立的检测方法对88份山羊鼻拭子样品及43份疑似羊支原体性肺炎（Mycoplasmal pneumonia of sheep and goats, MPSG）病料进行检测。将检测结果为Movi阳性的肺组织样品进行分离鉴定，并对分离株Hsp70基因进行序列分析。结果显示，建立的qPCR检测方法其相关系数为1.00,扩增效率为96.0%,斜率为-3.411,Y轴截距为37.29。特异性强，与丝状支原体山羊亚种（Mycoplasma mycoides subsp.capri, Mmc）、山羊支原体山羊肺炎亚种（Mycoplasma capricolum subsp.capripneumoniae, Mccp）、莱氏无胆甾原体（Acholeplasmalaidlawii, AL）、无乳支原体（Mycoplasma agalactiae, Maga）、伪结核棒状杆菌（Corynebacterium pseudotuberculosis, CP）、羊口疮病毒（orf virus, ORFV）、牛支原体（Mycoplasma bovis, Mb）等牛羊常见病原均无交叉反应；敏感性高，最低检测限为5.72 copies·μL^-1;重复性优，组内变异系数和组间变异系数均小于1.00%。6株Movi分离株Hsp70基因全长均为1 818 bp,与其它Movi参考株核苷酸和氨基酸同源性分别为96.0%～99.4%和98.0%～100.0%;进一步分析发现，山羊源Movi均比绵羊源多1个N-糖基化位点。遗传演化分析表明，其均处于ClusterⅠA亚分支（均为山羊源）。综上，本研究建立了特异性强、敏感性高、重复性优的基于Hsp70基因的Movi的qPCR检测方法。序列分析发现，不同来源Movi的Hsp70基因核苷酸同源性高；遗传演化分析证实，Movi福建株与山羊源分离株遗传关系较近。本研究不仅为Movi临床诊断提供了技术支持，更为进一步了解Movi遗传演化规律提供参考。