文献类型： 中文期刊

作者： 汪伟 ¹ ; 何孔旺 ¹ ; 倪艳秀 ¹ ; 周俊明 ¹ ; 张雪寒 ¹ ; 俞正玉 ¹ ; 吕立新 ¹ ; 茅爱华 ¹ ; 温立斌 ¹ ; 王小敏 ¹ ; 李彬郭 ¹ ; 容莉 ¹ ;

作者机构： 1.江苏省农业科学院兽医研究所,农业部兽用生物制品工程技术重点实验室,国家兽用生物制品工程技术研究中心

关键词： 猪链球菌2型;粘附因子;荧光定量PCR

期刊名称： Agricultural Science & Technology

ISSN： 1009-4229

年卷期： 2013 年 10 期

页码： 1378-1382

摘要： [目的]建立定量检测SS2粘附因子mRNA转录水平的荧光定量PCR方法。[方法]根据已报导的SS2相关粘附因子(包括MRP、FBPS、CPS2J)及管家基因aroA,以GenBank登录的核苷酸序列,设计特异性引物,利用RTPCR扩增和克隆各粘附因子的核苷酸片段,构建含有各自引物扩增序列的重组质粒作为阳性模板,建立检测各粘附因子的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法。[结果]利用优化的Real-time PCR体系建立了各粘附因子和aroA的扩增曲线、标准曲线和溶解曲线。标准曲线表明,起始模板数与Ct值之间线性关系好,相关系数R2均达0.995以上。此方法特异性好,扩增产物形成单一的特异性熔解峰;敏感性高,初始模板的检出下限达1.0×102拷贝数/μl;重复性好,组内变异系数均小于2%。[结论]该研究为在分子水平上探究不同SS2菌株对细胞粘附差异的机制提供了技术手段。