文献类型： 中文期刊
作者： 卢洪婷 1 ; 朱雪蛟 2 ; 周金柱 2 ; 张雪寒 2 ; 陶然 2 ; 郭容利 2 ; 牛家强 1 ; 李彬 1 ;
作者机构： 1.西藏农牧大学动物科学学院/农业农村部西藏包虫病防治重点实验室/西藏高原动物疫病研究自治区高校重点实验室
2.江苏省农业科学院兽医研究所/农业农村部兽用生物制品工程技术重点实验室
关键词： NUB1;NEDD8;基因克隆;细胞定位;基因表达
期刊名称： 畜牧与兽医
ISSN： 0529-5130
年卷期： 2025 年 57 卷 008 期
页码： 43-48
收录情况： 北大核心
摘要： 旨在对猪源泛素样蛋白负调控因子1(NUB1)进行鉴定、表达和细胞定位分析,并探究NUB1对猪轮状病毒(PoRV)的复制、先天性免疫、神经前体细胞表达发育调控下调蛋白8(NEDD8)通路调节的影响.设计带有KpnⅠ和XhoⅠ酶切位点的引物并在C端带入His标签,以猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)的cDNA为模板,扩增NUB1基因,并克隆到pcDNA3.1(+)载体;利用Lipofectamine? 3000脂质体转染重组质粒到MARC145细胞,Western blot和间接免疫荧光试验检测NUB1在MARC145细胞中的表达情况,共聚焦显微分析技术确定NUB1定位情况.结果:成功扩增出猪源NUB1基因,并构建NUB1真核表达质粒pcDNA3.1(+)-NUB1-His;重组质粒能在MARC145细胞中表达,NUB1蛋白定位于细胞核和细胞浆.综上,本试验成功构建了可外源表达NUB1的真核表达质粒pcDNA3.1(+)-NUB1-His,为后续研究NUB1的生物学功能及其对PoRV复制的影响奠定了基础.
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